Versuch
Mein Name ist Justinus Blomkwist. Ich bin Diplomuschis We(h)bmeister und helfe ihr bei ihren Versuchsanordnungen (Vermehrung von Vektoren in E. coli u.a.). Sie werden allerdings noch ein Weilchen auf sich warten lassen, da sie zunächst ihr mysteriöses Kulturlabor eingerichtet sehen möchte; heutzutage versehen junge Wissenschaftlerinnen keine niederen Tätigkeiten mehr, da die nobel winkenden Preise das zeitlich nicht zulassen. So bleibt mir alterndem Hiwi zunächst nicht mehr, als auftragsgemäß einen Dank an Ichichich auszusprechen für die ansprechende Gestaltung (die allerdings leichte Veränderungen erfahren wird), an Dirk Olbertz für die Gastfreundschaft – und weiterhin virtuelle Regale zu basteln.




daniel buchta am 27.Jul 10  |  Permalink
Und wer räumt die Petrischalen ein?

frau braggelmann am 18.Sep 10  |  Permalink
na, wenn der stress hier nachlässt, komm ich mal vorbei. herbstputz machen...

diplomuschi am 20.Nov 11  |  Permalink
Vektoren

3 Material und Methoden
3.1 Molekularbiologische Methoden
3.1.1 Vermehrung von Vektoren in E. coli und Isolierung von Plasmid-DNA
3.1.2 Transformation
3.1.3 Expression der Acetyl-CoA Synthetasen (ADP-bildend) aus Pyrococcus furiosus und der Succinyl-CoA Synthetase aus Pyrobaculum aerophilum
3.1.4 Zellernte und Zellaufschluß
3.2 Proteinbiochemische Methoden
3.2.1 Ultrafiltration
3.2.2 Reinigung der rekombinanten Enzyme
3.2.3 Colorimetrische Bestimmung der Proteinkonzentration nach Bradford
3.2.4 Bestimmung der apparenten molekularen Masse mittels Gelfiltration
3.2.5 Trichloressigsäure-Fällung
3.2.6 SDS-Polyacrylamidgelelektrophorese (SDS-PAGE)
3.2.7 Herstellung von Succinyl-CoA
3.3 Charakterisierung der Enzyme
3.3.1 Charakterisierung der Enzyme in Richtung Acylat-Bildung mittels Ellmann-Reagenz
4 Ergebnisse
4.1ACD-Wildtyp und ACD-Mutante aus P. furiosus
4.1.1 Expression und Reinigung der Genprodukte PF1540 und PF1787
4.1.2Charakterisierung der ACD aus P. furiosus
4.2.1 Expression und Reinigung der ACD-Mutante aus P. furiosus
4.2.2 Charakterisierung der PfACD-Mutante
4.3 Arsenolyse-Experimente des PfACD Wildtyps und der Pf-ACD-Mutante
4.4 Expression und Reinigung der Genprodukte PAE2312 und PAE2313
4.4.1 Charakterisierung der SCS aus P. aerophilum

Stand 2009